Дэн Эйкройд начинал с изучения психологии, криминальной социологии и политологии в Оттавском университете Карлтона, где и увлёкся комедией — писал скетчи для местного кабельного телевидения. В 20 лет он присоединился к труппе The Second City в Чикаго и Торонто.
В 1975 году Эйкройд стал одним из основателей шоу «Saturday Night Live», где придумал знаменитые скетчи «The Blues Brothers» с Белуши и «Two Wild and Crazy Guys» со Стивом Мартином. Успех «The Blues Brothers» привёл к полнометражному фильму 1980 года — Эйкройд написал сценарий и спродюсировал саундтрек, который шёл вразрез с тогдашней модой на диско и панк.
В кино он исполнил роли доктора Рэя Стантца в «Ghostbusters», сына персонажа Джессики Тэнди в «Driving Miss Daisy», одинокого отца в «My Girl» и киллера в «Grosse Pointe Blank» — в этих работах проявилось его умение играть как комедию, так и драму.
